Dados do Trabalho

Título

FATOR DE NECROSE TURMORAL α PROMOVE TRANSIÇÃO ENDOTÉLIO-MESENQUIMAL (ENDMT) POR MEIO DA HISTONA 3.1 DEVIDO AO AUMENTO DAS ESPÉCIES REATIVAS DE OXIGÊNIO

Introdução

A inflamação vascular pode levar à transição do fenotipo endotelial para mesenquimal (EndMT), um processo no qual as células endoteliais perdem sua função normal e adotam fenótipos mesenquimais. Esta transição contribui para disfunção vascular e doenças como hipertensão.

Objetivo

Invetigar o papel da Espécie Reativa de Oxigênio (ERO) no processo de EndMT no contexto da inflamacao.

Método

Utilizamos células endoteliais humanas HULEC-5a (células endoteliais pulmonares) tratadas com TNF-α (10 ng/ml), uma citocina pró-inflamatória para a inducao de EndMT. As células tratadas foram utilizadas para medir os níveis de proteínas e mRNA por Western Blot e qPCR, respectivamente. Os níveis de ERO nucleares foram medidos utilizando um biossensor geneticamente codificado, NLS-Orp1roGFP2, estavelmente transfetado em células HULEC-5a. Para investigar se o óxido nítrico (NO) ou derivados oxidantes estavam envolvidos na degradação da H3.1, foram utilizados inibidores do óxido nítrico sintases (NOS), L-NIO (20 μM) e 1400w (70 nM). Análise do transcriptoma completo (RNAseq) de células estimuladas com TNFα na presença e ausência de inibidores de NOS foi realizada para detectar diferenças na regulação da expressão gênica por TNFα, NO ou ambos.

Resultados

A EndMT foi induzida em células endoteliais tratando-as com TNF-α por até 72 horas. A indução de EndMT levou à redução de marcadores específicos endoteliais, como VE-Cadherina e eNOS, e ao aumento de α-SMA (alfa actina de músculo liso) e N-cadherina, marcadores da linhagem mesenquimal. Nos mesmos pontos temporais, observamos aumentos significativos nos níveis de ROS nucleares, acompanhados pela perda de Histona 3.1. A perda de H3.1 foi prevenida por inibidores de NOS, como L-NIO e 1400W, indicando um papel do NO nesse processo. A análise do transcriptoma completo revelou genes diferencialmente regulados por TNFα, NO ou ambos, destacando a importância do NO na remodelação da cromatina e na expressão gênica associada à EndMT, uma vez que marcadores de EndMT (por exemplo, Colágeno tipo 5, SMAD6, ICAM, ITGB, etc.) foram identificados.

Conclusão

Nossa pesquisa sugere que ERO nucleares estão envolvidos na remodelação da cromatina associada à EndMT induzida por inflamação. O modulamento da NOS para prevenir a perda de H3.1 associada à cromatina suprime a EndMT in vitro. Este mecanismo poderia potencialmente abrir novos caminhos para o tratamento terapêutico da EndMT na inflamação vascular e prevenção de doenças cardiovasculares como a hipertensão.